我們通過核酸檢測才能檢測出身體內部的基因序列有沒有問題,現在核酸檢測的方法是pcr核酸檢測,這種方法是什么意思,主要檢測手段是什么,大概幾天出結果。
PCR的意思是聚合酶鏈式反應,能夠用來擴增DNA,從而將微量的DNA擴增到能夠檢測的程度。有些病毒的核酸是DNA,需要采用這個方法進行檢測。所以PCR并不是進行的檢查,而是檢測DNA的一種方法。比如乙肝病毒DNA定量,用的就是這一種方法。檢查DNA的目的,一方面是可以診斷疾病,如果連病原體的DNA都能檢測到,就說明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復制的多少,從而判斷病情嚴重程度或者治療效果。
進行核酸檢驗,需要經過取樣、留樣、留存、核酸提取、上機檢測五個步驟。
核酸檢測的第一步就是采集人體分泌物,用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽后壁及雙側咽扁桃體處。
第二步醫(yī)務人員進行留樣,將試子頭浸入細胞保存液中,折斷尾部后立即旋緊管蓋。
第三部要將樣本放入密閉袋中,保存好并及時送檢。
第四步將樣本送進實驗室,提取核酸。
第五步,將提取物進行熒光PCR擴增反應。
核酸檢測操作過程需要幾個小時,一般1-2天出結果。目前新冠病毒的核酸檢測主要是使用RT-PCR法檢測試劑盒,操作是:1、檢測人員先用核酸提取試劑盒提取患者標本里的核酸。2、把提取到的核酸放進檢測試劑中復制。3、結果判定。第1步和第2步都有嚴格的操作流程和操作條件,整體耗時在1-4小時之間,最后判定結果。醫(yī)院的檢測是上午統一上機,到統一出結果差不多5個小時,也就到了下午,然后統一上報,不會隨到隨檢。所以下午或晚上所送的標本是第2天做,有的醫(yī)院自己不具備實驗室條件,不能做,需送到上一級實驗室做,保守估計時間是1-2天。
所謂RT-PCR 就是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的擴增(PCR)相結合的技術。
① 提取病毒的RNA
先從樣本中提取出病毒的RNA。具體來說,就是在樣本中加入核酸提取試劑,把病毒破壞,讓核酸釋放出來。
② 把病毒RNA“反轉錄”成cDNA
通過反轉錄技術(RT),把病毒的RNA“反轉”成一種特異DNA,即cDNA(因為病毒RNA結構不穩(wěn)定,所以把病毒RNA轉換成穩(wěn)定的cDNA會更方便檢測)
這里會用到核酸檢測試劑盒中一種叫“反轉錄酶”的物質。而完成轉錄后,所有工作都將圍繞cDNA展開。
③ 進行cDNA的擴增與檢測
簡單說就是擴增cDNA的數量。這里應用的就是PCR,全稱聚合酶鏈式反應。具體來說,就是借助試劑盒中一些特殊物質,讓cDNA不斷復制,使其數量呈指數式增長。
當cDNA擴增的同時,試劑盒中還有一種叫熒光探針的東西同時工作。它會釋放熒光信號,cDNA每完成一次擴增,熒光信號就會增加一點,而PCR檢測儀就能記錄到一個熒光信號增加的Ct值。
④ 出結果
這一步就是根據檢測儀記錄的Ct值,進行檢測結果分析。
理想狀態(tài)下,如果樣本中有新冠病毒,那么在cDNA完成預訂次數的擴增后,檢測儀記錄的Ct值就會形成一個逐漸上升的S形曲線,檢測結果為陽性;如果沒有類似的S型曲線,檢測結果就為陰性。
做完以上所有工作,通常需要4~6小時。